中级分析化学实验：综合与设计性实验

实验编号：U19S14700

关键词：荧光探针，有机合成，生物医学成像

又名：荧光标记探针制备及成像虚拟仿真实验

此项目与激光共聚焦显微镜—上样出结果实验相关 OLYMPUS FV3000

（一）内容介绍

本实验合成了双光子甲醛荧光探针，并进行了相关成像检测。

实验分为3个模块，模块1，荧光探针制备；模块2，荧光探针光谱测试实验；模块3，细胞成像实验。

模块1，荧光探针制备

（1）中间体A1的合成

（2）荧光探针Na-FA的合成

（3）产物表征

模块2，荧光探针光谱测试实验

（1）测试溶液配制

（2）测试过程

模块3，细胞成像实验

（1）内源性甲醛成像实验

（2）细胞共定位成像实验

（3）组织成像实验

取4周龄小鼠的肝脏，切片处理

（4）内源性甲醛组织成像实验

（二）实验的特色和亮点

针对甲醛荧光探针存在短波长激发（激发光普遍小于600 nm）及不能实现深层次穿透等不足之处，本实验利用经典的双光子荧光平台，引入新型甲醛识别位点肼基，制备了新型双光子甲醛荧光探针Na-FA，并对产物进行了表征。实验测定了荧光探针的最大吸收波长，并进行了荧光滴定实验，动力学实验和荧光选择性测试。最后利用激光扫描共聚焦显微镜，对细胞和小鼠肝脏组织进行了成像。

相比于甲醛的传统检测方法，荧光显微镜成像技术因其操作简使、无损伤检测和高灵敏度、选择性等优势而备受关注。其中的双光子荧光成像技术具有利用近红外双光子激发，很低的背景荧光（即更强的抗干扰能力）和更高的成像分辨率，以及较深的穿透能力（能够实现深层次检测）等优势而广泛应用于组织内的生物活性小分子的检测中。