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一、实验目的
1、掌握采样及样品分割方法。
2、了解常见固定液的种类和配方,学习固定的方法。
3、了解样品冲洗方法和掌握整体染色方法。
4、掌握脱水的方法,透明的方法及浸蜡的方法。
5、掌握包埋的方法。
6、掌握切片、粘片的方法,掌握旋转切片机的结构及使用方法。
7、掌握二重染色及封片的方法。
二、实验原理
根据研究需要选择合适的材料及部位,用化学或者物理的方法迅速杀死植物细胞、组织,使细胞、组织的形态结构尽可能保持在接近生活时的状态,才能揭示植物组织或器官真正的结构。经固定的材料制片后细胞或组织不易损坏,而且能显示原来的细微结构。
石蜡切片法采用化学固定法。固定的材料必须新鲜,取材后马上固定。含有气泡的材料投入固定液后,材料不会下沉,故须将气泡抽出,使材料下沉。
常用FAA固定液,卡诺固定液。
材料与固定液的比例以1:20为宜。
染色是使用一种染料(单染),或者几种不同的染料(复染)使不同的组织显示出同一种或不同的颜色,便于显微观察。
脱水应逐级进行,由低浓度到高浓度。材料在各级乙醇中停留的时间按材料大小和性质而定,一般停留30 min-2 h。
石蜡在60℃烘箱中使熔化的,液态石蜡浸入细胞或者组织中,低于熔点石蜡会迅速凝固,和材料凝固后融为一个整体,有利于在切片机上切成薄片。
三、实验内容
该实验共包括6个模块:
模块一:石蜡切片-取材与固定
模块二:石蜡切片-冲洗、复水和苯胺番红整染
模块三:石蜡切片-脱水、透明、浸蜡
模块四:石蜡切片-包埋
模块五:石蜡切片-切片、粘片、展片与烤片
模块六:石蜡切片-脱蜡、复染与封片及观察