服务案例

（一）内容介绍

在组织培养中，植物种子是带菌的，在接种前都必须进行表面消毒，这是取得培养成功的最基本和重要的前提，常用消毒剂对外植体进行消毒，从室外取来的材料一般先用自来水冲洗数分钟。

酶解法制备原生质体的原理是利用酶溶液对细胞壁成分的降解作用。

二乙酸荧光素（Fluorescein Diacetate，FDA）是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体的生活力鉴定染料，其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异：FDA本身不产生荧光，也无极性，能自由渗透出入完整的细胞膜。当FDA进入活细胞后，被细胞内的脂酶分解，生成有极性的、能产生荧光的物质——荧光素，该物质不能自由透过活的细胞膜，积累在细胞膜内，因而使有活力的细胞产生绿色荧光；而无活力的细胞因不能使FDA分解，而无法产生荧光。FDA也可用于流式细胞仪。荧光素的激发和发射波长分别是488nm和530nm。因此可以利用染料通过原生质体的差异性，在荧光显微镜下观察形态进行区分坏死原生质体和正常原生质体。

本项目主要包含以下内容：

（1）黄瓜幼苗组织培养基本方法。

（2）黄瓜子叶原生质体提取基本步骤。

（3）常用FDA特异性染料在细胞死亡检测中的应用原理。

本虚拟仿真实验分为3个模块，模块1，样品预培养；模块2，样品预处理；模块3，原生质活力检测。

模块1，样品预培养

模块2，样品预处理

模块3，原生质活力检测

（二）实验的特色和亮点

虚拟仿真实验根据不同实验过程给出相应的实验结果，通过实验结果的分析，有助于掌握黄瓜幼苗组织培养和原生质体提取的基本方法，通过FDA染色方法加深对原生质体活性鉴定的理解和认识，为进一步实现植物细胞融合、远缘杂种、胞质杂种和创制优质种质资源的后续实验打下扎实的操作基础。