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(一)内容介绍
根据死亡方式的不同,细胞死亡主要可分为坏死和凋亡两种类型。细胞坏死是细胞受到强烈的理化或生物因素作用,引起的细胞肿大、胀裂、细胞内容物溢出,细胞核的变化较慢,DNA降解不充分并引起周围组织发生炎症等。细胞凋亡是机体生命活动中重要的细胞学事件,是指由一定的生理或病理条件触发的由基因控制的程序性细胞死亡方式。它是一个主动的、高度有序的、涉及一系列酶参与的过程,与细胞坏死的过程和表现有很大的差别。细胞凋亡的检测常基于凋亡细胞的形态学变化和生化特征,其中细胞核染色质DNA断裂是细胞凋亡的标志特征。因此可以利用不同染料与凋亡细胞、坏死细胞和正常细胞内DNA的结合差异,在荧光显微镜下观察形态进行区分。
在细胞凋亡过程中,内源性核酸酶被激活,在核小体连接部位打断染色质DNA,形成180-200bp或其整数倍数的DNA片段。进行琼脂糖凝胶电泳时,这些DNA片段形成DNA梯带(DNA ladder);相比之下,正常细胞DNA不降解,电泳条带表现为大分子片段;坏死细胞的DNA虽然也存在降解,但长度不一,表现为连续分布的弥散条带。此外,DNA断裂的原位末端标记法和凋亡过程中蛋白酶家族等相关信号分子的检测也是常用手段。
本项目主要包含以下内容
(1)细胞凋亡的形态学特征。
(2)常用DNA特异性染料在细胞凋亡形态学检测中的应用原理。
(3)细胞凋亡过程中DNA断裂的标志性特点。
本虚拟仿真实验分为3个模块,模块1,细胞凋亡的诱导;模块2,细胞凋亡的形态学观察;模块3,细胞凋亡的生化特征检测。
模块1,细胞凋亡的诱导
模块2,细胞凋亡的形态学观察
模块3,细胞凋亡的生化特征检测
(二)实验的特色和亮点
细胞凋亡是生命活动中非常重要的事件之一,通过特异性药物诱导体外培养的细胞发生凋亡,再把凋亡细胞与正常细胞和部分坏死细胞进行比较,能够更深刻理解细胞凋亡的过程和特点。
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